کیت PCR Real Time Virus Virus Monkeypox
جزئیات محصول
استفاده در نظر گرفته شده
برای تشخیص ویروس آبله میمون در نمونه های سرم انسانی یا اگزودای ضایعه با استفاده از سیستم های Real Time PCR استفاده می شود.
اصل تست
این محصول یک سیستم سنجش زمان واقعی PCR Taqman® مبتنی بر پروب فلورسنت است.پرایمرها و پروب های خاصی برای تشخیص ژن F3L ویروس آبله میمون طراحی شده اند.کنترل داخلی که ژن حفاظت شده انسانی را هدف قرار می دهد، جمع آوری نمونه، پردازش نمونه و فرآیند PCR در زمان واقعی را برای جلوگیری از نتایج منفی کاذب نظارت می کند.این کیت یک سیستم لیوفیلیزه کاملاً پیش مخلوط است که شامل مواد مورد نیاز برای تشخیص ویروس آبله میمون است: آنزیم تقویت کننده اسید نوکلئیک، آنزیم UDG، بافر واکنش، پرایمر اختصاصی و پروب.
مطالب اصلی
اجزای ارائه شده در جدول ذکر شده است.
| اجزاء | بسته | جزء |
| ویروس آبله میمونپیش میکس لیوفیلیزه | 8 لوله PCR نواری× 6 کیسه | پرایمرها، پروب ها، مخلوط dNTP/dUTP، Mg2+، Taq DNA پلیمراز، آنزیم UDG |
| کنترل مثبت MPV | 400 میکرولیتر × 1 لوله | توالی های DNA حاوی ژن Target |
| کنترل منفی MPV | 400 میکرولیتر × 1 لوله | توالی های DNA حاوی بخش ژن انسانی |
| محلول انحلال | 1 میلی لیتر × 1 لوله | تثبیت کننده |
| گواهی انطباق | 1 قطعه | / |
جریان عملیات
1. نمونهمجموعه:نمونه باید در لوله های استریل مطابق با آن جمع آوری شود
با مشخصات فنی استاندارد
2. آماده سازی معرف (منطقه آماده سازی معرف)
اجزای کیت را بیرون بیاورید، آنها را در دمای اتاق برای استفاده در حالت آماده به کار متعادل کنید.
3. پردازش نمونه (منطقه پردازش نمونه)
3.1 استخراج اسید نوکلئیک
توصیه می شود 200 میکرولیتر نمونه مایع، کنترل مثبت و کنترل منفی برای استخراج اسید نوکلئیک، با توجه به الزامات و روش های مربوط به کیت های استخراج DNA ویروسی، تهیه شود.
3.2 پودر لیوفیلیزه حل کردن و اضافه کردن قالب
با توجه به تعداد نمونه، پرمیکس لیوفیلیز شده ویروس Monkeypox Virus را تهیه کنید.یک نمونه نیاز به یک لوله PCR حاوی پودر پیش مخلوط لیوفیلیزه دارد.کنترل منفی و کنترل مثبت باید به عنوان دو نمونه در نظر گرفته شوند.
(1) 15 میکرولیتر محلول حل کننده را به هر لوله PCR حاوی پیش مخلوط لیوفیلیز شده اضافه کنید، سپس 5 میکرولیتر نمونه استخراج شده / کنترل منفی / کنترل مثبت را به ترتیب به هر لوله PCR اضافه کنید.
(2) لوله‌های PCR را محکم بپوشانید، لوله‌های PCR را با دست تکان دهید تا پودر لیوفیلیزه کاملاً حل و مخلوط شود، مایع را با سانتریفیوژ با سرعت کم آنی به ته لوله‌های PCR جمع کنید.
(3) اگر از ابزار رایج PCR Real-Time برای تشخیص استفاده کنید، لوله های PCR را مستقیماً به ناحیه تقویت منتقل کنید.اگر از BTK-8 برای تشخیص استفاده کنید، باید عملیات زیر را انجام دهید: انتقال 10 میکرولیتر مایع از لوله PCR به چاه تراشه واکنش BTK-8.یک لوله PCR مربوط به یک چاه روی تراشه است.در حین عملیات پیپت، از عمودی بودن پیپت 90 درجه اطمینان حاصل کنید.نوک پیپت مانع آئروسل باید با نیروی متوسط در مرکز چاه قرار گیرد و هنگامی که پیپت به دنده اول رسید (برای جلوگیری از ایجاد حباب) فشار دادن پیپت را متوقف کنید.پس از پر شدن چاه ها، یک غشای تراشه واکنش را بیرون بیاورید تا همه چاه ها را بپوشاند و سپس تراشه به منطقه تشخیص تقویت منتقل می شود.
4. تقویت PCR (منطقه تشخیص)
4.1 لوله PCR/تراشه واکنش را در مخزن واکنش قرار دهید و نام هر واکنش را به ترتیب مربوطه تنظیم کنید.
4.2 تنظیمات تشخیص فلورسانس: (1) ویروس آبله میمون (FAM).(2) کنترل داخلی (CY5).
4.3 پروتکل دوچرخه سواری زیر را اجرا کنید
پروتکل ABI7500، Bio-Rad CFX96، SLAN-96S، QuantStudio:
| مراحل | درجه حرارت | زمان | چرخه ها | |
| 1 | پیش دناتوراسیون | 95 درجه سانتیگراد | 2 دقیقه | 1 |
| 2 | دناتوره سازی | 95 درجه سانتیگراد | 10 ثانیه | 45 |
| بازپخت، گسترش، کسب فلورسانس | 60 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه | ||
پروتکل BTK-8:
| مراحل | درجه حرارت | زمان | چرخه ها | |
| 1 | پیش دناتوراسیون | 95 درجه سانتیگراد | 2 دقیقه | 1 |
| 2 | دناتوره سازی | 95 درجه سانتیگراد | 5 ثانیه | 45 |
| بازپخت، گسترش، کسب فلورسانس | 60 درجه سانتیگراد | 14 ثانیه | ||
5. تجزیه و تحلیل نتایج (لطفاً به راهنمای کاربر ابزار مراجعه کنید)
پس از واکنش، نتایج به طور خودکار ذخیره می شود.برای تجزیه و تحلیل، روی "Analyze" کلیک کنید، و ابزار به طور خودکار مقادیر Ct هر نمونه را در ستون نتیجه تفسیر می کند.نتایج کنترل منفی و مثبت باید مطابق با "6. کنترل کیفیت" زیر باشد.
6. کنترل کیفیت
6.1 کنترل منفی: بدون Ct یا Ct>40 در کانال FAM، Ct≤40 در کانال CY5 با منحنی تقویت نرمال.
6.2 کنترل مثبت: Ct≤35 در کانال FAM با منحنی تقویت نرمال، Ct≤40 در کانال CY5 با منحنی تقویت نرمال.
6.3 نتیجه در صورتی معتبر است که تمام معیارهای فوق رعایت شود.در غیر این صورت، نتیجه نامعتبر است.
تفسیر نتیجه
نتایج زیر ممکن است:
| مقدار Ct کانال FAM | مقدار CT کانال CY5 | تفسیر | |
| 1# | بدون Ct یا Ct>40 | ≤40 | ویروس آبله میمون منفی |
| 2# | ≤40 | هر نتیجه ای | ویروس آبله میمون مثبت |
| 3# | 40 تا 45 | ≤40 | تست مجدد؛اگر هنوز 40 تا 45 است، به عنوان 1# گزارش دهید |
| 4# | بدون Ct یا Ct>40 | بدون Ct یا Ct>40 | بی اعتبار |
توجه داشته باشید: اگر نتیجه نامعتبر رخ دهد، نمونه باید جمع آوری و دوباره آزمایش شود.
اطلاعات سفارش
| نام محصول | گربهخیر | اندازه | نمونه | ماندگاری | ترانس.& Sto.دما |
| کیت PCR Real Time Virus Virus Monkeypox | B001P-01 | 48 تست / کیت | سرم/ ترشح ضایعه | 12 ماه | -25-15℃ |
